MONICA BARRIUSO IGLESIAS

BARRIUSO IGLESIAS MÓNICA.Esta memoria recoge los resultados obtenidos en el estudio sobre la respuesta al estrés por pH en C. glutamicum, permitiendo así tener un conocimiento más amplio de promotores regulados por un cambio de pH. La importancia de este trabajo reside en el gran interes existente por el estudio de promotores regulables, ya que pueden ser utilizados biotecnologicamente para expresar a voluntad (en este caso concreto, en funcion del pH del cultivo) genes que sean acoplados a estos promotores. Asi, se describe por primera vez a Corynebacterium glutamicum ATCC 13032 como un microorganismo alcalofilo, apoyado por un fenomeno de adaptacion al pH observado cuando se utilizan cultivos a pH 9.0 como inoculos para iniciar cultivos a pH 10.0. En el proteoma citoplasmatico y de membrana de C.glutamicum WT a diferentes concidiciones de pH se aprecio como 21 proteinas presentaban variacion en su expresion. Se ha observado la existencia de un posible mecanismo de regulacion a pH basico en el que estarian involucrados la cadena respiratoria y el ciclo de los acidos tricarboxilicos. De entre las proteinas identificadas se eligio el operon de la F0F1-ATP sintasa de membrana, como candidato para estudiar la induccion de su promotor ante cambios del pH. En el estudio de la expresion del operon atpBEFHAGDC u operon f0f1 (F0F1-ATP sintasa), se observa un transcrito de 7'5 kb y un transcrito monocistronico de 1'2 kb, estando ambos inducidos a pH 9.0. Se ha caracterizado la region promotora del operon f0f1 identificando un sitio de inicio de la transcripcion (TSP), cuyas secuencias consenso para las cajas -10 y -35 parecen indicar una regulacion por el factor sH. Mediante Northern con la cepa C. glutamicum ?sigH (cepa delecionada en el gen sigH, que codifica el factor sH), se concluyo que cuando este gen se deleciona se obtienen de nuevo los transcritos de 7'5 y 1'2 kb pero la induccion a pH 9.0 del operon observada anteriormente en ambos transcritos, desaparece en